Съдържание
Когато посещавате микробиология на по-високо ниво, вашият учител може да изисква от вас да завършите проект, в който трябва да идентифицирате непозната бактерия чрез серия от тестове. За да се идентифицират правилно тези бактерии, е необходимо да има цялото лабораторно оборудване и да познават различни лабораторни процедури. Също така е изгодно да има схема на бактериите и техните лабораторни тестове, така че да можете да идентифицирате вашите бактерии.
инструкции
-
Подгответе всички тестове преди началото на експеримента. Това включва подготовка на агарови плочи и тръби, както и подготовка на необходимите индикатори, като реактив на Ковак. Обозначете всички тръби и плочи по подходящ начин, така че да не се смесват, което води до погрешни резултати.
-
Посейте бактериите си. Това ще определи формата и цвета на вашата бактерия, като грам-положителна (лилава), грам-отрицателна (червена или розова), кокосови орехи (кръгови), спирохети (спирала) или пръчки. За да посеете бактерията си, ще ви е необходима чиста острие, вода, кристализирана виолетка, йод, белина, сафранин, абсорбираща хартия, светлинен микроскоп и някои хартиени кърпи. След като фламбувате цикъла, използвайте го, за да поставите капка вода върху острието. Завъртете отново цикъла и след това поставете малко количество от непознатите бактерии в капката вода. Прекарайте острието над пламъка няколко пъти, за да изсъхне и напълно прикрепете бактериите към острието. Покрийте я с кристализирана виолетка, оставете я за минута и след това внимателно я измийте. След това покрийте острието с йод. Оставете за 30 секунди и след това измийте. Поставете парче абсорбираща хартия върху острието, за да отстраните излишната вода. След това изсипете белина върху острието. След пет секунди измийте, за да отстраните белина. Накрая покрийте острието със сафранин. След 40 секунди измийте острието и го подсушете внимателно с хартиена кърпа. Поставете капка масло на мястото на бактериите на слайда и погледнете под микроскопа. Отбележете формата и цвета на видимите бактерии.
-
Тествайте оксидазата във вашите бактерии. За това ще ви трябва хартиен филтър, оксидазен реагент, Е. coli, Pseudomonas и неговите неизвестни бактерии. В този тест, Е. coli и Pseudomonas са контролите. Вашата бактерия трябва да е по-малко от 24 часа за този тест. Завъртете дръжката и поставете малко количество от всяка бактерия върху хартиения филтър. Използвайте капкомер, за да поставите една капка от реагентната оксидаза във всяка бактерия. След 10 секунди отбележете цвета на всяка бактерия. Е. coli ще даде положителен резултат и Pseudomonas ще даде отрицателен резултат. Положителните бактерии за ензима цитохромоксидаза ще станат пурпурни, а негативните бактерии няма да променят цвета си.
-
Тест за сероводород (SIM). Натиснете дръжката и я използвайте, за да вземете някои бактерии от плаката. Инокулирайте SIM тръбата с бактериите си и я покрийте. Тази епруветка се оставя в пещта за 18 до 24 часа при 37 ° С. Определете дали Вашата бактерия е мобилна (има флагелум). Ако има растеж и облачност далеч от мястото, където сте ваксинирали бактериите, то е мобилно. След това поставете две капки реагент на Ковак в епруветката. Ако има промяна в цвета на червено или розово, бактерията му е положителна за този тест и съдържа триптофан, като по този начин е производител на индол. Ако тръбата стане черна, бактериите му произвеждат сероводород.
-
Извършете тест за цитрат на Simmon. Инокулирайте бактериите в две епруветки с агар на Simmon. Оставете ги в пещта за 18 до 24 часа при 37 ° C. Първоначално агарът е зелен, но ако вашите бактерии използват цитрат като въглероден източник, цветът ще се промени от зелен на син. Синият е положителният резултат. Ако тръбите останат зелени, техните бактерии са отрицателни за използването на цитрат като единствен източник на въглерод.
-
Извършете тест с метилово червено (MRVP). За този тест са необходими две епруветки, съдържащи разтвор на пептон, буфери и декстроза (или глюкоза). Инокулирайте всяка епруветка с неизвестните бактерии и се върнете в печката за 18 до 24 часа при 37 ° С. Когато сте готови, добавете три капки метилово червено в епруветка. Това ще бъде MR тръбата. Ако тръбата се промени от жълта на червена, бактерията му е положителна и използва смесен път на киселина по време на ферментацията (произвеждат се млечна, оцетна и мравчена киселини). Във втората тръба се добавят три капки от реагента VP. Ако тръбата стане червена, бактерията е положителна за образуването на диацетил, ферментационен продукт. Ако тръбата стане кафява, бактерията ви е отрицателна.
-
Намерете бактериите си, като отбележите положителните и отрицателните резултати в диаграмата.
