Съдържание

• инструкции
• Възстановяване на колоната
• съвети
• предупредителен
• Какво ви трябва

Високоефективната течна хроматография (HPLC) е обичаен метод за лабораторен анализ, при който пробата се разделя на химически компоненти, докато преминава през колона. Тази колона се пълни с порест материал, обикновено силикагел. Стандартна колона с обратна фаза, подобно на С8, понякога може да се запуши или да се замърси. Тези колони могат да бъдат извлечени с помощта на много прости техники.

инструкции

Десният разтворител може да възстанови мръсна колона (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Възстановяване на колоната

1. Освободете колоната и обърнете нейното положение, така че подвижната фаза да влиза през обичайно изхода на колоната. Прикрепете изход към другия край на колоната (който е първоначалният запис) и го оставете да се разреди.

2. Изпомпва се поредица от разтворители по ред на намаляване на полярността. Препоръчва се основната серия да започне с метанол, след това да се премине към ацетонитрил, след това ацетонитрил / изопропанол (75:25), изопропанол, метиленхлорид и хексан. Ако подвижната фаза, която е в колоната, е абсорбираща, се препоръчва преминаване с вода преди в метанол. Достатъчен е поток от един до два милилитра на минута и трябва да се изпомпва приблизително десет колони за обем от всеки разтворител. Колоната за обем е вътрешното пространство на колоната и се изчислява чрез (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), където DI е вътрешният диаметър на колоната и L е дължината.

   
   

3. Изпомпва се още десет обема изопропанол през колоната, за да се подготви за използване с оригиналната подвижна фаза. Ако оригиналната подвижна фаза е омекотена, помпайте вода през колоната след изопропанола, преди да се върнете към оригиналната подвижна фаза.

4. Освободете колоната, обърнете я и я включете отново, за да е в първоначалното си положение (така че подвижната фаза да влезе в дясната страна на колоната). Свържете отново изхода на високоговорителя към детектора.

съвети

• Ако този процес не почиства напълно колоната, може да се използва 50:50 смес от диметилсулфоксид (DMSO) и диметилформамид (DMF). Остатъците от протеини и метални йони могат да изискват други видове разтворители, като например йон-съхраняващи реагенти или разтвор на етилен диамин тетра-оцетна киселина (EDTA).

предупредителен

• В някои уреди, гръбнакът ще има грубо метално сито като вход. В този случай връщането на колоната ще позволи на стационарната фаза да напусне колоната и това не се препоръчва. Консултирайте се с вашия дилър, ако не сте сигурни.
• Използваният в този процес разтворител е потенциално токсичен при поглъщане и вдишване. Използвайте нормални лабораторни предпазни мерки при работа.

Какво ви трябва

• HPLC устройство
• вода
• метанол
• ацетонитрил
• изопропанол
• Метиленхлорид
• хексан