Съдържание
Високоефективната течна хроматография (HPLC) е инструмент, използван за отделяне на вещества от смес. Разделянето и идентифицирането на някои химикали се извършва главно в хроматографската колона на системата. Налични са много типове колони за CLAE и всеки се използва за специфичен тип анализ. Колоната C18 е най-силната неполярна, използвана общо. След продължителна употреба за продължителен период от време, дебитът на разтворителя през него намалява и времето за анализ се увеличава. Друга причина за намаляването на времето за анализ е наличието на проби, които оставят малки количества химикали в материала на колоната, намалявайки способността да се отделят. Възстановяването на повърхността му може да се извърши чрез обработка на материала с поредица от специфични разтворители, за да се почисти от останалите проби и да се съживи поддържащият материал.
Етап 1
Извадете колона C18 от посоката на потока и я поставете в обратната посока. Връщането на разтворителя обратно през него ще облекчи ефекта на натрупване, който се проявява с течение на времето. Трябва да се внимава да не остане твърде много материал, натрупан в края на колоната. Някои фабрики използват по-голяма мрежа в горната част, така че когато потокът промени посоката, мрежата е в долната позиция. Този метод на възстановяване се нарича обръщане на потока. За да предотвратите натрупването да тече към системния детектор и евентуално да причини препятствие, оставете го да функционира без свързан детектор и насочете потока от колоната към изхвърляне.
Стъпка 2
Поставете тръбата за преминаване на разтворителя в серия от разтворители, за да се елуира всяко съединение, задържано в колоната, в обратна посока. Тези разтворители се различават по своите хидрофилни характеристики. Като ги променяте, ще елюирате съединения с еднакво разнообразна хидрофилна природа. Използвайте последователно 50 ml от всеки от следните разтворители: вода (ако използвате буфер), метанол, изопропанол, дихлорометан, хексан, дихлорометан и изопропанол.
Стъпка 3
Сменете колоната в правилната посока и накарайте разтворителя да тече през нея. Използвайте поне 75 ml, за да го измиете, преди да продължите. Тествайте го с модел, който сте използвали, когато е бил нов, и проверете резултатите. Обърнете внимание при достигане на максималните точки на задържане и общото време за анализ. Степента, до която тези атрибути съвпадат с първоначалния тест, когато е бил все още нов, ще показва степента, до която колоната е била възстановена. Ако резултатите не са задоволителни, заменете колоната с нова и изхвърлете старата.
