Съдържание
- Разрушаване на клетъчни стени
- Премахване на липидите
- Премахване на протеини
- Утаяване на ДНК
- Пречистваща ДНК
Студеният алкохол се използва за отделяне на ДНК от разтвори на водна основа, което позволява да се пречисти за последващо генетично изследване. Добавянето на алкохол към разтвор, съдържащ ДНК, е прост начин да го направи чист при по-ниски температури и да забави ензимите, които го разграждат, като дава по-добри резултати от екстракцията.
Разрушаване на клетъчни стени
Процедурите за екстракция за получаване на чиста ДНК трябва да се отърват от всички молекулни и химични компоненти на тъканта, от която се екстрахира ДНК. Първите стъпки включват разрушаване на клетъчните стени. Това може да се направи с различни химични агенти, които са каустични до клетъчните мембрани, но не увреждат ДНК. Клетките могат също да бъдат обработени с ултразвук, хомогенизирани или смлени, за да разрушат мембраните.
Премахване на липидите
След като клетъчните стени се разрушат, се добавя детергент, за да се отървете от мазнините и маслата, които образуват клетъчните мембрани. Детергентите причиняват разтваряне на масла и мазнини в разтвора.
Премахване на протеини
Протеините и ензимите могат да се смилат чрез добавяне на протеаза към разтвора. Протеазите разграждат протеините на малки пептиди и аминокиселини.
Утаяване на ДНК
Добавянето на леденостуден алкохол към разтвор ще се утаи и агрегира ДНК. Генетичният материал може да бъде събран чрез центрофугиране на пробата и декантиране на течния слой. Тя трябва да съществува като малка утайка на дъното на центрофужната тръба.
Пречистваща ДНК
ДНК може да бъде промита чрез повторно суспендиране в студен алкохолен разтвор и повторно центрофугиране няколко пъти, за да се получи много чиста проба. Типичните използвани алкохоли включват етанол и изопропанол. Този процес оставя много чиста проба при строги тестове.
